Influența tripsinei asupra activității motorii a venei portă: Teză de doctor în științe medicale: 312.01 – Fiziologie și fiziopatologie

Abstract

Structura tezei: introducere, 4 capitole, concluzii generale şi recomandări, bibliografie din 143 titluri, 120 pagini de text de bază, 72 figuri, 47 tabele. Rezultatele obţinute sunt publicate în 11 lucrări ştiinţifice. Cuvinte-cheie: vena porta, celulele musculare netede, miocitul neted vascular, receptor activat de proteaze , hipertripsinemie, denudarea endoteliului, celule Cajal, oxid nitric, hipertripsinemie, parametrii contracției Scopul lucrării: Evaluarea in vitro a particularităților răspunsului venei portă la acțiunea tripsinei în diferite precondiționări și postcondiționări. Obiectivele cercetării: Evaluarea in vitro a răspunsului venei portă la acțiunea tripsinei în diferite concentrații ale ionilor de calciu prin determinarea amplitudinii și frecvenței contracțiilor, timpului de relaxare și contracție și a indicilor derivați (intensitatea funcționării structurilor și suprafața contracțiilor). Evaluarea in vitro a răspunsului venei portă la acțiunea tripsinei în diferite concentrații ale ionilor de sodiu și hidrogen. Evaluarea in vitro a răspunsului venei portă la acțiunea cafeinei, acetilcolinei și carbacolului în pretratarea ei cu tripsină. Evaluarea in vitro a răspunsului venei portă la acțiunea tripsinei în dependență de prezența oxidului nitric, precum și absența acestuia pe fundalul diferitor concentrații ale ionilor de calciu. Noutatea şi originalitatea ştiinţifică: În premieră s-au studiat particularitățile răspunsului contractil al venei portă izolată și perfuzată clasic cu soluția Krebs la acțiunea tripsinei modelată în 3 modele experimentale: (1) in vivo prin reproducerea pancreatitei acute; (2) in vivo prin administrarea tripsinei și (3) in vitro prin administrarea proteazei în perfuzat. Caracterul răspunsului s-a estimat în mod complex, fiind apreciate în acest context valorile parametrilor de bază ai contracției, precum și ale timpului de contracție, relaxare și timpului total în diferite concentrații ale ionilor de calciu. De asemenea, s-a evaluat reactivitatea venei portă la tripsină în condiții de acidoză și variații ale concentrației ionilor de sodiu, precum și caracterul influenței proteazei asupra contracturii venoase indusă de cofeină și depolarizare maximă inerentă acțiunii soluției de KCl (140 mM). Pentru evidențierea rolului oxidului nitric în răspunsul venei portă la acțiunea tripsinei indicii contractilității acesteia au fost estimați în modelul denudat al venei prin acțiunea acidului colic, inclusiv la noima diferitor concentrații ale ionilor de calciu. Problema ştiinţifică importantă soluționată: Constă în elucidarea in vitro a particularităților acțiunii tripsinei asupra reactivității venei portă, inclusiv pe fundalul modificării concentrației ionilor de Ca și H+ , denudării endoteliului, fapt ce a permis identificarea reperelor de predicție și corectare a periclitării circuitului portal propice ameliorării statusului funcțional și clinic al pacienților cu situații patologice asociate cu hipertripsinemie. Semnificaţia teoretică și valoarea aplicativă a lucrării: Reactivitatea venei portă izolată excelează prin deprecieri similare ale amplitudinii și frecvenței contracțiilor la acțiunea tripsinei proprie modelului de administrare in vitro și in vivo, câr și modelului de hipertripsinemie reprodus in vivo prin modelarea pancreatitei acute, astfel că acest fenomen poate fi un predictor și o țintă terapeutică a periclitării circuitului portal în situațiile clinice asociate cu hipertripsinemie, în primul rând în pancreatite. Acidoza, cât și leziunea endotelială, diminuează potențialul contractil al venei portă, iar acest efect devine și mai pronunțat pe fundalul acțiunii tripsinei, fapt ce justifică algoritmul de corectare a reactivității venei portă prin ameliorarea dezechilibrului acido-basic și disfuncției endoteliale, în afară de atenuarea activității tripsinice a sângelui. Implementarea rezultatelor ştiinţifice: Rezultatele studiului dat au fost implementate în activitatea didactică și ştiinţifică a Catedrei de fiziologie a omului și biofizică și Catedrei de fiziopatologie și fiziopatologie clinică al USMF “Nicolae Testemiţanu”.

Thesis structure: introduction, 4 chapters, general conclusions and recommendations, bibliography of 143 titles, 120 pages of basic text, 72 figures, 47 tables. The obtained results are published in 11 scientific papers. Keywords: portal vein, vascular smooth myocyte, protease-activated receptor, hypertrypsinemia, endothelial denudation, Cajal cells, nitric oxide The aim of the research: In vitro evaluation of the particularities of the response of the portal vein to the action of trypsin in different precondiționing and postcondiționing. The research objectives: In vitro evaluation of the response of the portal vein to the action of trypsin in different concentrations of Ca++ by determining the amplitude and frequency of contractions, the time of relaxation and contraction, the intensity of the funcționing of the structures and the area of contractions. In vitro evaluation of the response of the portal vein to the action of trypsin in different concentrations of Na+ and H+. In vitro evaluation of the response of the portal vein to the action of caffeine, acetylcholine and carbacol in its pretreatment with trypsin. In vitro evaluation of the response of the portal vein to the action of trypsin depending on the presence or absence of NO in different concentrations of Ca++. The scientific novelty and originality: For the first time, the peculiarities of the contractile response of the isolated, perfused with Krebs solution portal vein to the action of trypsin modeled in 3 experimental models were studied: (1) in vivo by reproducing acute pancreatitis; (2) in vivo by administration of trypsin and (3) in vitro by administration of protease in the perfusate. The character of the response was estimated in a complex way, the basic parameters of the contraction, as well as contractile times in different concentrations of Ca+ were measured. Also, the reactivity of the portal vein to trypsin under condițions of acidosis and variations in sodium ion concentration was evaluated, as well as the character of the influence of the protease on the venous contracture induced by caffeine and the maximal depolarization inherent to the action of the KCl solution (140 mM). To highlight the role of nitric oxide in the response of the portal vein to the action of trypsin, its contractility indices were estimated in the denuded model of the vein by the action of cholic acid, including at different concentrations of Ca++. The scientific solved problem: It consists in the in vitro elucidation of the particularities of the trypsin action on the reactivity of the portal vein, including against the background of changes in the concentration of Ca++ and H+ ions, the denudation of the endothelium, a fact that allowed the identification of landmarks for predicting and correcting the endangerment of the portal circuit, conducive to improving the status funcțional and clinical of patients with pathological situations associated with hypertrypsinemia. The theoretical significance and the applcative value of the research: The reactivity of the isolated portal vein excels through similar impairments of the amplitude and frequency of contractions to the action of trypsin specific to the in vitro and in vivo administration model, as well as to the hypertrypsinemia model reproduced in vivo by modeling acute pancreatitis, so that this phenomenon can be a predictor and a therapeutic target of portal circuit endangerment in clinical situations associated with hypertrypsinemia, primarily in pancreatitis. Acidosis, as well as endothelial injury, diminishes the contractile potential of the portal vein, and this effect becomes even more pronounced against the background of trypsin action, a fact that justifies the algorithm for correcting the reactivity of the portal vein by ameliorating acid-base imbalance and endothelial dysfuncțion, in addition to alleviating blood trypsin activity. The implementation of scientific results: The results of the given study were implemented in the didactic and scientific activity of the Department of Human Physiology and Biophysics and Department of Physiopathology and Clinical Physiopathology of USMF "Nicolae Testemițanu".

Структура диссертации: введение, 4 главы, общие выводы и рекомендации, библиография из 143 наименований, 120 страниц основного текста, 72 рисунка, 47 таблиц. Полученные результаты опубликованы в 11 научных статьях. Ключевые слова: воротная вена, сосудистый гладкий миоцит, протеазоактивируемый рецептор, гипертрипсинемия, эндотелиальная денудация, клетки Кахаля, оксид азота Цель исследования: оценка in vitro особенностей ответа воротной вены на действие трипсина при различном прекондиционировании и посткондиционировании. Задачи исследования: Оценка in vitro реакции воротной вены на действие трипсина в различных концентрациях Ca++ путем определения амплитуды и частоты сокращений, времени расслабления и сокращения, интенсивность функционирования структур и площади сокращения. Оценка in vitro реакции воротной вены на действие трипсина в различных концентрациях Na+ и H+. Оценка in vitro ответа воротной вены на действие кофеина, ацетилхолина и карбахола при ее предварительной обработке трипсином. Оценка in vitro ответа воротной вены на действие трипсина в зависимости от присутствия NO, а также как его отсутствие на фоне разной концентрации Ca++. Новизна и оригинальность исследований: Впервые изучены особенности сокращений изолированной и перфузированной раствором Кребса воротной вены на действие трипсина в 3-х экспериментальных моделях: (1) in vivo при воспроизведении острого панкреатита; (2) in vivo путем введения трипсина и (3) in vitro путем введения протеазы в перфузате. Характер ответа оценивали комплексно, были измерены основные параметры сокращения, а также продолжительности сокращения при разных концентрациях Са++. Также оценивали реактивность воротной вены на трипсин в условиях ацидоза и изменения концентрации Na+, а также характер влияния протеазы на контрактуру вены, индуцированную кофеином, и максимальную деполяризацию, присущую действию раствора KCl (140 мМ). Для выявления роли NO в ответной реакции воротной вены на действие трипсина были оценены показатели сократимости в модели вены без эндотелия под действием холевой кислоты, в том числе при различных концентрациях Са++. Решенная научная задача: выяснение особенностей действия трипсина на реактивность воротной вены in vitro, в том числе на фоне изменения концентрации ионов Са2+ и Н+, без эндотелия, позволившее выявить ориентиры для прогнозирования и коррекции нарушения портального кровотока, что улучшает функциональное и клиническое состояния больных с гипертрипсинемией. Теоретическая и практическая значимость работы: Реактивность изолированной воротной вены превосходит аналогичные нарушения амплитуды и частоты сокращений на действие трипсина, характерного для модели введения in vitro и in vivo, а также для модель гипертрипсинемии, воспроизведенная in vivo путем моделирования острого панкреатита, так что это явление может быть предиктором и терапевтической мишенью нарушения портального контура при гипертрипсинемии, прежде всего при панкреатите. Ацидоз и повреждение эндотелия снижают сократимость воротной вены, этот эффект растет на фоне действия трипсина, что обосновывает алгоритм коррекции реактивности воротной вены путем улучшения кислотно-щелочного баланса и эндотелиальная дисфункции, в дополнение к снижению активности трипсина в крови. Внедрение научных результатов: Результаты данного исследования были внедрены в дидактическую и научную деятельность Кафедры физиологии человека и Кафедры физиопатологии и клинической физиопатологии ГУМФ «Николае Тестемицану».