Cultivation of raw material based on Pichia pastoris for biosimilar growth hormone manufacture in Republic of Moldova

Abstract

Rezumat. Pichia pastoris este o specie de drojdie metilotrofică. Rata de creștere ridicată pe un mediu ieftin și aproape fără proteine, calea secretorie care prezintă o mare parte din structura și funcția sistemului secretor al mamiferelor ca capacitate de pliere, de glicozilare și secretare a proteinelor, face ca această specie să fie potrivită pentru utilizare biotehnologică. Gena modificată a somatropinei umane recombinate GH1 este inserată în genomul culturii Pichia pastoris prin restricție în apropierea promotorului genei AOX1 în plasmida vectorului de expresie pPIC9K. Gena GH1 este activată de promotorul genei AOX1 care poate fi indusă de prezența metanolului în mediul de cultură. Ulterior, secvența „Prepro-alfa Factor Leader" din Saccharomyces cerevisiae este adăugată la secvența modificată astfel încât somatropina obținută să poată fi secretată în mediul de cultură.

Abstract. Pichia pastoris is a methylotrophic yeast. High growth rate on an inexpensive and almost protein-free medium, the secretory pathway that exhibits much of the structure and function of the mammalian secretory system as the capacity to fold, to glycosylate and to secrete proteins makes this system suitable for biotechnological use. The altered GH1 recombinant human somatropin gene is directionally cloned into the Pichia pastoris culture genome by a restriction near the AOX1 gene promoter in the expression vector plasmid pPIC9K. The GH1 gene is activated by the AOX1 gene promoter which may be induced by the presence of methanol in the culture medium. Subsequently, the "Prepro-alpha Factor Leader" sequence from Saccharomyces cerevisiae is added to the modified sequence so that the obtained somatropin could be secreted into the culture medium.