Determinarea linearităţii în procesul de validare a metodei hplc de dozare a unor capsule combinate

Abstract

INTRODUCERE. Cromatografia de lichide de înaltă presiune (HPLC) este metoda cea mai uzuală de analiză a produselor combinate, care posedă un grad înalt de sensibilitate și informativitate înalt. Metoda este universală, poate fi combinată cu alte metode, posedă eroarea minimă, precum și o eficienţă economică acceptabilă. SCOPUL STUDIULUI. Stabilirea domeniului de linearitate în procesul de validare a metodei HPLC de dozare a nicergolinei (NIC) și piracetamului (PIR) în capsule combinate. MATERIAL ȘI METODE. Trei serii experimentale (01, 02, 03) de capsule operculate cu conţinut de NIC, PIR și EP au fost preparate în Laboratorul de Elaborare, Analiză, Standardizare și Control al Medicamentului al CȘM, cu concentraţie de NIC 4,50 mg/capsuă, PIR –200,00 mg/capsulă și EP –50,00 mg/capsulă; probe standard de NIC și PIR; cromatograf de lichide Shimadzu-20A, coloană EC/Nucleosil C18 5μm (100*4,6mm), detector UVVis; faza mobilă acetonitrilul:tampon fosfat cu pH 3,0 în raport de 18:82 la volum, temperatura coloanei cromatografice 30°C; volum de injectare 20 µl; debit fază mobilă 1,5 ml/min, eluare izocratică; lungimile de undă ale detectorului au fost setate la 288 nm pentru NIC și 220 nm pentru PIR. Validarea metodei spectrofotometrice s-a petrecut în conformitate cu prevederile ghidului ICH. REZULTATE. Linearitatea s-a cercetat pe domeniile de concentraţie 5-30 µg/ml pentru NIC și 600-1200 µg/ml pentru PIR, la timpi de retenţie 1,91 min pentru PIR și 5,61 min pentru NIC. S-au utilizat soluţii de cinci niveluri de concentraţie. Linearitatea a fost evaluată prin analiza de regresie liniară. Ecuaţia de regresie a fost calculată pentru fiecare curbă. Au fost preparate trei serii independente de soluţii standard de lucru (la cinci niveluri de concentraţie diferite) de NIC și PIR. Determinările au fost efectuate în triplicat, fiind construite curbele de calibrare. La nivelul de semnificaţie =0,05, SD pentru valorile ariilor picurilor cromatografice au fost 18055,66 cu panta 62349,0 și intercepţa -70291,0 la NIC și 69770,96 cu panta 4252,8 și intercepţia +1E+06 la PIR. Valorile r2 au constituit 0,99450 pentru NIC și respectiv 0,99520 pentru PIR. CONCLUZII. Metoda HPLC elaborată prezintă linearitate acceptabilă la intervalele de concentraţii nominalizate, iar acurateţea rezultatelor obţinute în analiza de regresie a fost evaluată prin analiza reziduală și distribuţia reziduurilor poate fi considerată normală, deoarece valoarea probabilităţii pentru testul Shapiro-Wilk este mai mare decât valoarea de 0,05.

INTRODUCTION. High-pressure liquid chromatography (HPLC) is the most common method for the analysis of combined products, which possesses a high degree of sensitivity and informativeness. The method is universal and can be combined with other methods. Also, it possesses minimum error, and economic efficiency. THE AIM OF STUDY. To establish the linearity range in the validation process of the HPLC method for the determination of nicergoline (NIC) and piracetam (PIR) in combined capsules. MATERIAL AND METHODS. Three experimental series (01, 02, 03) of capped capsules containing NIC, PIR and EP were prepared in the Laboratory for Drug Development, Analysis, Standardization and Control with NIC concentration 4.50 mg/capsule, PIR - 200.00 mg/capsule and EP - 50.00 mg/capsule; NIC and PIR standard samples; Shimadzu-20A liquid chromatograph, EC/Nucleosil C18 5μm column (100*4,6mm), UV-Vis detector; acetonitrile mobile phase: phosphate buffer pH 3.0 in ratio of 18:82 by volume, chromatographic column temperature 30°C; injection volume 20 µl; mobile phase flow rate 1.5 ml/min, isocratic elution; detector wavelengths were set at 288 nm for NIC and 220 nm for PIR. Validation of the spectrophotometric method was carried out according to ICH guidelines. RESULTS. Linearity was investigated over the concentration ranges 5-30 µg/ml for NIC and 600-1200 µg/ml for PIR, at retention times of 1.91 min for PIR and 5.61 min for NIC. Solutions of five concentration levels were used. Linearity was assessed by linear regression analysis. The regression equation was calculated for each curve. Three independent series of working standard solutions (at five different concentration levels) of NIC and PIR were prepared. Determinations were performed in triplicate and calibration curves were constructed. At significance level =0.05, SD for chromatographic peak area values were 18055.66 with slope 62349.0 and intercept -70291.0 at NIC and 69770.96 with slope 4252.8 and intercept +1E+06 at PIR. The r2 values were 0.99450 for NIC and 0.99520 for PIR respectively. CONCLUSIONS. The developed HPLC method shows acceptable linearity at the concentration ranges, and the accuracy of the results obtained in the regression analysis was evaluated by residual analysis and the distribution of residuals can be considered normal, since the probability value for the Shapiro-Wilk test is higher than the value 0.05.