http://repository.usmf.md:80/xmlui/handle/20.500.12710/23558 2026-04-11T23:08:39Z 2026-04-11T23:08:39Z Ulinici, Mariana http://repository.usmf.md:80/xmlui/handle/20.500.12710/26792 2024-02-01T09:11:51Z 2023-01-01T00:00:00Z

Production of lentivirus particles pseudotyped with SARS-COV-2 spike protein for neutralisation or drug antiviral activity assays Ulinici, Mariana Introduction. Lentivirus particles are commonly employed as gene delivery vectors due to their ability to transduce both dividing and non-dividing cells efficiently. Lately, there have been alterations made to lentivirus particles so that they can express heterologous envelope proteins on their surface. This ability has been exploited to produce lentivirus particles pseudotyped with the SARS-CoV-2 Spike glycoprotein.Aim. The aim of the study was to produce lentivirus particles pseudotyped with the SARS-CoV-2 Spike glycoprotein for use in neutralisation or drug antiviral activity assays.Material and methods.A second-generation HIV-LV system was used to produce lentivirus particles pseudotyped with SARS-CoV-2 Spike glycoprotein. The lentiviral transfer plasmid plVTHM encoding for the reporter gene eGFP, the HIV packaging plasmid psPAX2encoding for gagpol, and a plasmid carrying the sequence encoding for the structure glycoprotein Spike, pcDNA3-SARS-CoV-2-Spike-D614GΔ19, were used. The plasmid sequence encoding for eGFP was flanked by long terminal repeats to facilitate host genome integration. To ensure controlled transduction of the lentivirus SARS-CoV-2, a lentivirus expressing Vesicular Stomatitis Virus (VSV) envelope was produced with the same protocol used for the lentivirus SARS-CoV-2 but replacing the plasmid coding for the Spike proteins with the plasmid pMD2. Gencoding for the VSV envelope. The VSV Lentivirus was used as a positive control of transduction since it can infect both cell lines HEK 293-ACE2 and HEK 293. In contrast, SARS-CoV-2 lentivirus can infect only HEK 293 expressing ACE2 receptor onthe membrane. After transduction, the lentivirus particles pseudotyped with the SARS-CoV-2 Spike glycoprotein were harvested from the culture medium, purified and stored at -80°C until fur-ther use. Results. The lentivirus preparations, VSV and SARS-CoV-2, were titred by trans-ducing HEK 293-ACE2 cells with 200 μl of 2-fold viral preparation dilutions and analysed after 72 hours by flow cytometry. SARS-CoV-2 preparation had a titer around ~105TU/ml (average measured on 5 independent experiments of viral preparation). This titer was about one order of magnitude lower than those achieved with VSV lentivirus, which obtained a titer of around ~106TU/ml. The lentivirus particles pseudotyped with SARS-CoV-2 Spike glycoprotein produced in this study carried the mutation D614G accompanied by the deletion (Δ19) of the last 19 amino acids at the C-terminal domain, corresponding to the ER-retention motif. This variant has been demonstrated to increase the pseudotyping efficiency in several studies. The deletion region is located at the cytoplasmic region and appears to remove the steric interference given by the cytoplasmic tail with the viral capsid. Conclusions.The specificity of the SARS-CoV-2 lentivirus was demonstrated by its ability to infect only cells expressing the ACE2 receptor on the membrane. The lentivirus particles pseudotyped with SARS-CoV-2 Spike glycoprotein produced in this study provide a specific and efficient tool for neutralisation or drug antiviral activity assays to evaluate the efficacy of potential treatments against SARS-CoV-2 as well as to identify potential therapeutics for COVID-19.

2023-01-01T00:00:00Z Shakeela, Daud Ajab, Gul Hameeda, Panezei http://repository.usmf.md:80/xmlui/handle/20.500.12710/26783 2024-01-27T11:26:16Z 2023-01-01T00:00:00Z

Comparative analysis of blood and breath test for alcohol in forensics Shakeela, Daud; Ajab, Gul; Hameeda, Panezei Introduction. Alcohol consumption is globally recognized as the third-largest risk factor for premature death, posing significant harm to health. In numerous countries, alcohol stands as the primary cause of nearly a third of total traffic accidents and related fatalities. BAC Breath analyzer has never been used in Pakistan and there is no data available about the results of the BAC breath analyzer. Aim. To compare the concentration of alcohol in breath (BrAC) and blood (BAC) samples of drinkers by applying statistical analysis and Computational identification of binding sites of neuropeptide y protein and neuropeptide y receptor. Material and methods. Fifty participants took part in this study, providing both blood and breath samples under the influence of alcohol. Additional data, including age, height, weight, and the amount of alcohol consumed, was recorded to facilitate comprehensive statistical analysis. The chemical method was employed to detect alcohol presence in blood samples, utilizing Widmark’s Equation for calculating alcohol concentration. To find the concentration of alcohol in blood samples the mathematical procedure is the best ne to be used for research purposes. Simultaneously, a computational study was conducted to identify the binding sites of neuropeptide Y protein and its receptor protein. This computational analysis holds potential applications in the development of antibodies and drug development. Results. The results of both procedures were compared and analyzed using the Pearson product-moment correlation. The strong correlation, with a value of r=0.992, indicates a robust relationship between the outcomes of the two testing methods. Additionally, genetic factors of addiction were explored in this study. The graphical representation of our findings reveals that a few individuals exhibit a higher concentration of alcohol in blood compared to breath samples. The mean ratio ±SD for n=50 was 0.105±0.0782 and 0.094±0.0730, demonstrating consistency. The device used in this study has proven reliable in many regions, including 38 locations in Pakistan. Antibodies can aid in identifying the expression level of neuropeptide Y protein, a genetic factor in addiction. Computational data on the binding sites of neuropeptide Y protein and its receptor protein can be instrumental in developing peptide-based drugs. These drugs have the potential to mitigate the effects of neuropeptide Y protein based on the genetic factor of addiction in the body. Conclusions. The breath analyzer stands out as a reliable, efficient, and cost-effective tool for swiftly testing alcohol con-centration in the body, providing results in just 30 seconds. Its portability makes it applicable for use by law enforcement agencies, traffic police, and medical professionals, enabling rapid and convenient alcohol concentration assessments. The device's adaptability to various environmental conditions, including temperature and humidity fluctuations, enhances its versatility. This technology has the potential to replace traditional potassium dichromate tests in forensic sciences. The identified binding sites in our study offer opportunities for developing antibodies and drugs targeting the Neuropeptide Y protein. These antibodies can be instrumental in assessing the expression of neuropeptide Y protein, contributing to the evaluation of genetic factors related to addiction.

2023-01-01T00:00:00Z Bugneac, Veronica http://repository.usmf.md:80/xmlui/handle/20.500.12710/26782 2024-01-27T11:18:19Z 2023-01-01T00:00:00Z

Impactul statusului microbian al familiilor de albine în perioada iernatului Bugneac, Veronica Introducere. Albinele sunt incredibil de importante pentru echilibrul diferitor ecosisteme de pe glob. Asemenea tuturor organismelor vii, albinele sunt afectate de diferiți agenți patogeni precum bacterii, virusuri, ecto-și endoparaziți, fungi. Din acest considerent, sănătatea familiilor de albine și eficiența activității lor depinde în mare parte de măsurile sanitare veterinare, pe care le întreprinde apicultorul în strânsă colaborare cu medicul veterinar. La momentul actual există programe de monitorizare și de supraveghere sanitară veterinară a unităților apicole la nivel național. Acestea prevăd măsuri de control și de supraveghe a bolilor infecțioase la albine, precum și măsuri de eradicare a acestora în caz de apariție. Scopul. Analiza impactului statusului microbian al familiilor de albine în perioada iernatului. Material și metode. Ca material de cercetare au servit familiile de albine de la stupina experimentală a Institutului de Microbiologie și Biotehnologii al Universității Tehnice din Moldova. După perioada de iernat, la examinarea familiilor de albine au fost prelevate câte 50 de albine moarte din fiecare stup pentru cercetări bacteriologice în vederea stabilirii prezenței și diversității florei bacteriene de la albinele moarte în perioada iernatului. Pe medii de cultură uzuale, selective și speciale s-au studiat proprietățile morfologice ale coloniilor bacteriene dezvoltate, iar din coloniile obținute au fost preparate frotiuri, colorate după metoda Gram pentru cercetări microscopice. Rezultate.În perioada iernatului, la familiile de albine predomină o microfloră microbiană combinată. Pe mediile solide s-au dezvoltat intensiv colonii microbiene specifice pentru E. coli, prezentând cea mai mare intensitate de creștere comparativ cu alte forme bacteriene. Au fost puse în evidență și colonii clasice de Salmonella spp., de streptococi și de stafilococi. O intensitate mai redusă s-a observat pe mediul Czapek (colonii de fungi microscopici). La examinarea microscopică a frotiurilor preparate din coloniile microbiene și la studierea proprietăților biochimice s-a confirmat prezența E. coli, care au constituit peste 50% din totalul de bacterii, urmate de streptococi și de stafilococi,cu o pondere de până la 30%, de flora fungică, cu o pondere de 15%, și de bacterii din genul Salmonella,cu o rată de 5 %. Concluzii. Cercetările bacteriologice efectuate redau tabloul bacteriocenozei persistent al familiilor de albine în perioada rece a anului. Cunoașterea acestuia permite reducerea factorilor de risc în apariția unor boli de ordin bacterian sau fungic la familiile de albine în perioada de pregătire pentru iernat și pe parcursul perioadei de iernat. Monitorizarea bacteriologică a stupinelor de albine poate evidenția și minimiza riscurile de apariție a bolilor infecțioase la familiile de albine, precum și de a reduce sau de a exclude factorii de risc și favorizanți în declanșarea bolilor infecțioase la albinele adulte și la puiet.

2023-01-01T00:00:00Z Sîtnic, Victor Nistreanu, Victoria Savin, Anatolie http://repository.usmf.md:80/xmlui/handle/20.500.12710/26781 2024-01-27T11:11:35Z 2023-01-01T00:00:00Z

Genotiparea mistrețului cu utilizarea dispozitivului Bento Lab Sîtnic, Victor; Nistreanu, Victoria; Savin, Anatolie Introducere. Mistrețul aparține genului Susdin familia Suidae și fiind strămoșul porcului domestic se poate încrucișa ușor cu acesta. Hibridizarea între mistreț și porcul domestic crește gradul de invazivitate și afectează integritatea genetică și potențialul de adaptare al mistreților. Deoarece astfel de hibrizi de cele mai multe ori nu pot fi identificați morfologic, există mai multe metode și tehnici moleculare pentru diferențierea acestora de liniile pure. O astfel de metodă este genotiparea pe baza alelelor genei MC1R. Alelismul multiplu al acestei gene poate fi observat fenotipic prin diversitatea pigmentării pielii la porci. În prezent, gradul de hibridizare a mistreților din fauna Republicii Moldova este necunoscut, motivul principal fiind lipsa protocoalelor experimentale de laborator care ar permite identificarea specimenilor hibrizi. Scopul. În prezentul studiu ne-am propus utilizarea dispozitivului Bento Labpentru genotiparea unor specimene de mistreț din Republica Moldova în baza alelelor genei MC1R. Material și metode. Genotiparea a fost realizată prin digestia ampliconilor MC1R cu enzimele de restricție BspHI și BstUI (RFLP-PCR). Au fost prelevate 14 probe de la mistreț din diferite regiuni ale țării. ADN-ul genomic a fost extras conform protocolului GeneJET Genomic DNA Purification Kit, iar amplificarea s-a realizat cu utilizarea primerilor MC1R-FWși MC1R-REV modificați și a mastermixului DreamTaq Green PCR Master Mix (2X). Ampliconii obținuți au fost supuși digestiei cu enzimele BspHI și BstUI, produșii de digestie fiind vizualizați pe gel de agaroză de 1 % cu agent de intercalare GelGreen. Etapele de extragere, de deamplificareși vizualizare a ADN-ului au fost realizate cu dispozitivul Bento Lab. Acest dispozitiv este portabil și combină cele mai importante echipamente necesare pentru realizarea unei reacții de PCR: microcentrifugă, termociclor, casetă pentru electroforeză, bloc de alimentare încorporat și transiluminator. Rezultate. Analiza celor 14 probe a permis identificarea alelelor E+, eși a două genotipuri: E+E+ și E+e. E+reprezintă alela sălbatică și la mistreții de linie pură se întâlnește în formă homozigotă, în timp ce alela e se întâlnește la unii porci domestici. Astfel, genotipul homozigot E+E+a fost identificat în 13 probe, iar genotipul heterozigot E+e–într-o singură probă (specimen hibrid). Protocoalele de lucru au fost optimizate și adaptate la condițiile și la resursele laboratorului. Dispozitivul Bento Laba permis extragerea calitativă a ADN-ului genomic, realizarea reacției de PCR convențional și vizualizarea ADN-ului pe gel de agaroză. Produșii de digestie au putut fi clar vizualizați și au format un tablou electroforetic specific fiecărui genotip. Concluzii. Dispozitivul Bento Labși protocoalele experimentale menționate au fost utilizate cu succes pentru aplicarea metodei RFLP-PCR și genotiparea mistreților, și a permis identificarea unui specimen hibrid din cele 14 probe testate. Studiile de genotipare a mistreților din Republica Moldova ar eficientiza prevenirea focarelor de boli infecțioase (ex. pesta porcină africană), determinarea gradului de hibridizare în populațiile de mistreți și elaborarea măsurilor adecvate de conservare.

2023-01-01T00:00:00Z