Rezumat.
Pichia pastoris este o specie de drojdie metilotrofică. Rata de
creștere ridicată pe un mediu ieftin și aproape fără proteine, calea
secretorie care prezintă o mare parte din structura și funcția sistemului
secretor al mamiferelor ca capacitate de pliere, de glicozilare și
secretare a proteinelor, face ca această specie să fie potrivită pentru
utilizare biotehnologică. Gena modificată a somatropinei umane
recombinate GH1 este inserată în genomul culturii Pichia pastoris prin
restricție în apropierea promotorului genei AOX1 în plasmida vectorului
de expresie pPIC9K. Gena GH1 este activată de promotorul genei AOX1
care poate fi indusă de prezența metanolului în mediul de cultură.
Ulterior, secvența „Prepro-alfa Factor Leader" din Saccharomyces
cerevisiae este adăugată la secvența modificată astfel încât
somatropina obținută să poată fi secretată în mediul de cultură.
Abstract.
Pichia pastoris is a methylotrophic yeast. High growth rate on an
inexpensive and almost protein-free medium, the secretory pathway
that exhibits much of the structure and function of the mammalian
secretory system as the capacity to fold, to glycosylate and to secrete
proteins makes this system suitable for biotechnological use. The
altered GH1 recombinant human somatropin gene is directionally
cloned into the Pichia pastoris culture genome by a restriction near the
AOX1 gene promoter in the expression vector plasmid pPIC9K. The GH1
gene is activated by the AOX1 gene promoter which may be induced by
the presence of methanol in the culture medium. Subsequently, the
"Prepro-alpha Factor Leader" sequence from Saccharomyces cerevisiae
is added to the modified sequence so that the obtained somatropin
could be secreted into the culture medium.
