|
|
- IRMS - Nicolae Testemitanu SUMPh
- PROIECTE DE CERCETARE / RESEARCH PROJECTS
- PROIECTE NAȚIONALE / NATIONAL PROJECTS
- Proiecte Instituționale
Please use this identifier to cite or link to this item:
http://hdl.handle.net/20.500.12710/27348
| Title: | 15.817.04.04. F / Ingineria tisulară în crearea şi restabilirea ţesutului hepatic |
| Authors: | Nacu, Viorel |
| Principal investigator: | Nacu, Viorel |
| Project code: | 15.817.04.04. F |
| Start date: | 2015 |
| End date: | 2019 |
| Main results: | A fost elaborat dispozitivul pentru decelularizarea ficatului și s-a elaborat un nou protocol de decelularizare a ficatului(brevet de invenție 939 din 2015, brevet de invenție 1015 Z din 2016).Au fost obținute matrici decelularizate ale ficatului prin utilizarea soluției de NaCl și D-glucoză cu osmolaritate înaltă cu ulterioara perfuzare cu detergenți Triton X100 și SDS. A fost determinată citotoxicitatea matricilor decelelularizate pe celule stem de șobolani cu soluție de MTT 0,5% cu scanarea ulterioară la spectrofotometru s-a obținut o
viabilitate celulară de peste 80% versus lotul martor. A fost modificat radical protocolul de izolare a hepatocitelor. Dacă anterior izolam dintr-un ficat 3-5x108 hepatocite conform protocolului modificat numărul de celule s-a redus de 2 ori, însă viabilitatea celulară este de 96-100%.A fost improvizat un bioreactor în interiorul incubatorului cu CO2, au fost sterilizate ficatele decelularizate cu etanol de 70% sub acțiunea razelor UV timp de 30 minute în hota cu flux laminar, au fost conectate matricile matricile hepatice la sistema de perfuzie din cadrul bioreactorului cu pomparea mediului de cultură prin pompa 43peristaltică la viteza de 2 ml pe minută, ulterior la fiecare 60 minute timp de 5 ore printr-un cateter periferic se injectau în patul vascular a matricei ficatului cîte 5x106
hepatocite în 5 ml de mediu. Peste 12 ore de la ultima injectare a fost apreciată viabilitatea celulelor injectate și pH mediului de cultură, viabilitatea a fost de 60 % și o alcalinizare a mediului de cultură de perfuzat cu pH 8,3. După 48 de ore de la inițierea recelularizării viabilitatea celulară a fost de 28 %. La 72 de ore după inițierea recelularizării viabilitatea celulară a constituit 10%.Studiul histologic al matricilor extracelulare hepatice recelularizate au demonstrat că acestea sunt infiltrate în celule hepatice cu
1,2 nuclee, citoplasma cu incluziuni de lipide și glicogen, conturul membranei celulare bine păstrată, extravazarea lor în țesutul conjunctiv decelularizat. Arhitectonica conjunctivă a ficatului este păstrată, fibrele colagene sunt conturate și nefragmentate, iar celulele inoculate sunt viabile cu păstrarea scheletului celular(membrana celulară), și prezența incluziunilor de lipide, glucide și lipofuscină.Au fost efectuate la șobolani anastomoze microvasculare ale vaselor hepatice și tentative de revascularizare a ficatului decelularizat.
Au fost efectuate încercări de transplantare ectopică de ficat normal la șobolan. |
| Project impact: | În premieră în Republica Moldova au fost obţinute matrici decelularizate ale ficatului, reecelularizate ulterior cu celule autologe hepatice pentru obținerea unui ficat
nonimunogen. Importanţa decelularizării ficatului se exprimă prin faptul că poate fi creat in vitro prin tehnicile ingineriei tisulare un ficat funcţional care ulterior va putea fi utilizat
pentru transplantare. Anume, optimizarea procesului de decelelularizare este o condiţie prioritară penrtu a spori acceptarea grefei celulare, de aceea a fost evaluat gradul de
decelularizare a matricelor hepatice obţinute prin intermediul analizelor genetice a conţinutului de acizi nucleici, determinarea numărului de hepatocite, studiului histologic cu
hematoxilină-eozină, cît şi a celor biochimice de dozare a cantităţii de colagen, în scopul determinării nivelului de conservare a arhitectonicii conjunctive a ficatului.
Deoarece în Replublica Moldova numărul pacienților care stau în lista de așteptare pentru un transplant de ficat este în creștere, iar numărul donatorilor este limitat, cercetările
noastre sunt de o valoare socială și economică incomensurabilă prin faptul că celulele utilizate la repopularea matricei hepatice decelularizate sunt ale pacientului, ceea ce exclude
rejetul posttransplant și lipsa necesității de tratament imunosupresor care este destul de costisitor.Rezultatele obtinute în urma decelularizării ficatelor și obținerii matricelor hepatice
decelularizate, izolări hepatocitelor și populării matricelor date, transplantului ectopic al ficatelor au servit, de asemenea, la instruirea și familiarizarea studenților în cadrul cursului
de medicină regenerativă cu tehnicile ingineriei tisulare în crearea și restabilirea țesutului hepatic.De asemenea, rezultatele activității de cercetare au fost diseminate în cadrul lecției publice
„Actualități în transplantul de țesuturi și celule” consacrate Zilei Internaționale a Științei pentru Pace și Dezvoltare. Pe plan aplicativ au fost obținute mai multe contracte de colaborare cu Universitatea
Tehnică a Moldovei, Institutul de Fizică Aplicată, Centrul științific al medicamentului și IMSP Centrul Mamei și Copilului. Hepatocitele izolate au fost utilizate pentru testarea in
vitro a citotoxicității unor extracte din Agremonium Herba și Cichorii. Celule stem izolate și cultivate în cadrul laboratorului au fost utilizate pentru testarea citotoxicității unor nanoparticule și a unor materile din sticlă și hidroxiapatită. |
| Issue Date: | 2015 |
| URI: | http://repository.usmf.md/handle/20.500.12710/27348 |
| Appears in Collections: | Proiecte Instituționale
|
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.
|
