Optimizarea metodelor analitice pentru studiul fitochimic şi standardizarea produsului vegetal din specia Macleaya microcarpa (Maxim.) Fedde

Abstract

Rezumat Prezenta lucrare este dedicată elaborării procedeelor analitice pentru studierea compuşilor biologic activi, în primul rând alcaloizilor benzofenantridinici, în părţile aeriene de maclee. Studiul s-a efectuat pe mostrele prelevate din colecţia Centrului Ştiinţifi c de Cultivare a Plantelor Medicinale, IP USMF “Nicolae Testemiţanu”. În lucru s-a utilizat cromatograful de lichide Agilent 1260 cu detector UV-DAD şi coloane analitice cu faza inversă. Substanţele tanante s-au determinat la spectrofotometrul Lambda 25 (Perkin Elmer) prin metoda Farmacopeii Europene. Optimizării au fost supuse atât condiţiile de separare cromatografi că, cât şi tehnica de preparare a probelor, luând în vedere fenomenul legării alcaloizilor cu matricea biologică. Ca rezultat s-a elaborat un procedeu rapid şi efi cient pentru dozarea alcaloizilor benzofenentridinici cu aplicarea cromatografi ei de lichide în condiţii izocratiсe pe fază inversă cu catenă scurtă Kromasil 100 C1. Pentru dozarea unor grupe de compuşi polifenolici (fl avonozide şi acizi hidroxicinamici) s-a utilizat cromatografi a în regim gradient pe faza staţionară Zorbax Eclipse XDB-C8. S-a studiat repartizarea substanţelor biologic activi între diferite organe aeriene ale plantelor, confi rmând că frunzele, preferabil fără peţioli, sunt cele mai potrivite în calitate de materie primă. Pe baza studiilor efectuate a fost elaborat proiectul de monografi e farmacopeică pentru produsul vegetal „Frunze de maclee”. The present work is dedicated to the development of analytical procedures for studying of biologically active substances, fi rst of all benzophenanthridine alkaloids in aerial parts of Macleaya microcarpa (Maxim.) Fedde. The study has been performed on samples, taken of the collection of Scientifi c Centre for Cultivation of Medicinal Plants of the Nicolae Testemitanu SUMPh. In this work was used a liquid chromatograph Agilent 1260 with UV diode-array detector and reversed-phase analytical columns. Tannins have been determined on a spectrophotometer Lambda 25 (Perkin Elmer) by the European Pharmacopoeia method. To optimisation has been subjected both chromatographic separation conditions and the technique of assay preparation, taking into account the phenomenon of alkaloids building with the biological matrix. As a result, a quick and effi cient procedure for qualitative analysis of benzophenanthridine alkaloids has been developed, using liquid chromatography in isocratic conditions on a short-chain reversed phase Kromasil 100 C1. For determination of some groups of polyphenolic compounds (fl avonoid glycosides and hydroxycinnamic acids) was used the gradient elution chromatography on the stationary phase Zorbax Eclipse XDB-C8. Distribution of biologically active substances between various aerial organs of plants has been studied, and was confi rmed that leaves, preferable without petioles, are the most suitable as a raw material. On the basis of performed researches, a project of the pharmacopoeical monograph for herbal drug “Macleaya leaf” was developed. Данная работа посвящена разработке аналитических процедур для исследования биологически активных ве- ществ, в первую очередь бензофенантридиновых алкалоидов в надземных частях маклейи мелкоплодной. Иссле- дования были выполнены на образцах, взятых из коллекции Научного Центра по Выращиванию Лекарственных Растений при ГУМФ им. Николая Тестемицану. В работе использован жидкостной хроматограф Agilent 1260 с диодно-матричным УФ детектором и обращено-фазными аналитическими колонками. Дубильные вещества были определены на спектрофотометре Lambda 25 (Perkin Elmer) по методу Европейской Фармакопеи. Оптимизации были подвергнуты как условия хроматографического разделения, так и техника подготовки проб с учетом фено- мена связывания алкалоидов с биологической матрицей. В результате была разработана быстрая и эффективная процедура количественного определения бензофенантридиновых алкалоидов с применением жидкостной хро- матографии в изократических условиях на короткоцепочечной обращенной фазе Kromasil 100 C1. Для определния отдельных групп полифенольных соединений (флавоноидные гликозиды и гидроксикоричные кислоты) ис- пользовалась хроматография в режиме градиентного элюирования на стационарной фазе Zorbax Eclipse XDB-C8. Было исследовано распределение биологически активных веществ между различными надземными органами растений и получено подтверждение того, что листья, предпочтительно без черешков, являются наиболее подхо- дящими в качестве сырья. На основании выполненных исследований разработан проект фармакопейной статьи для растительного сырья «Маклейи лист».