DETERMINAREA INDOCIANINEI VERDE ÎN PLASMĂ SANGVINĂ UMANĂ PRIN TEHNICI LC-MS ŞI LC-DAD

Abstract

Introducere. Indocianina verde (ICG) este un compus fluorescent utilizat în diagnostic şi în studiile farmacocinet-ice. Datorită legării sale puternice de albumina serică şi distribuţiei rapide, este esenţială dezvoltarea unor metode analitice sensibile pentru monitorizarea concentraţiei plasmatice a ICG. Scop. Dezvoltarea şi compararea performanţelor a două metode cromatografice - LC-DAD şi LC-MS - în determinarea cantitativă a ICG în plasmă umană în studii farmacocinetice şi de diagnostic. Material şi metode. Soluţii standard de ICG 0,052-3,14 gg/mL în plasmă. Separarea s-a realizat pe coloană Zorbax SB-C18 (100 mmx3 mm, 3,5 gm), fază mobilă acid acetic 0,25% acetonitril (1:1, v/v), debit 1 mL/min, t= 40°C. Detecţie la 786 nm (DAD) şi în mod MS-SIM negativ pentru m/z 751.5/752.5 (MS), cu potenţial de ionizare 4500 V. Timp de retenţie 2,15 min. Rezultate. Metode analitice sensibile sunt necesare pentru măsurarea vitezei de eliminare a ICG din plasmă (PDR ICG), indice, care poate estima funcţia ficatului şi eficienţa absorbţiei substanţelor legate de proteine. În context chirurgical, valorile PDR ICG indică perfuzia locală şi, implicit, capacitatea de absorbţie a unui medicament la locul administrării. Ambele metode dezvoltate au demonstrat o bună liniaritate (R2>0,99). Concentraţia standard minimală utilizată şi cuantificată a fost de 0,0523 gg/mL (LC-DAD), respectiv 0,092 gg/mL (LC-MS), cu acurateţe medie 9,43% (DAD) şi 2,19% (MS), şi precizie relativă. Concluzii. Tehnicile de lucru aplicate sunt adecvate pentru determinarea Indocianinei verde în plasmă sangvină umană. LC-MS oferă o sensibilitate şi selectivitate mai mare, fiind recomandată pentru studii farma-cocinetice, în timp ce LC-DAD este potrivită pentru aplicaţii clinice de rutină.

Introduction. Indocyanine green (ICG) is a fluorescent compound used in diagnostics and pharmacokinetic studies. Due to its strong binding to serum albumin and rapid distribution, the development of sensitive analytical methods is essential for monitoring plasma concentration of ICG in pharmacokinetic studies. Objective. To develop and compare the performance of two chromatographic methods - LC-DAD and LC-MS - for the quantitative determination of ICG in human plasma in pharmacokinetic and diagnostic studies. Material and methods. Standard ICG solutions 0.052 to 3.14 gg/mL in plasma. Zorbax SB-C18 column (100 mm x 3 mm, 3.5 gm), mobile phase of 0.25% acetic acid: acetonitrile (1:1, v/v), flow rate 1 mL/min, at 40°C. Detection was done at 786 nm (DAD) and in negative MS-SIM mode for m/z 751.5/752.5 (MS), with an ionization potential of 4500 V. Retention time was 2.15 min. Results. Sensitive analytical methods are required to measure the ICG plasma disappearance rate (PDR ICG), an index that can estimate liver function and the efficiency of protein-bound substance absorption. In surgical contexts, PDR ICG values reflect local perfusion and, implicitly, drug absorption capacity at the administration site. Both developed methods demonstrated good linearity (R2 > 0.99) within the limits of the studied concentrations. The lowest quantifiable standard concentration was 0.0523 gg/mL (LC-DAD) and 0.092 gg/mL (LC-MS), with mean accuracy of 9.43% (DAD) and 2.19% (MS), and relative precision below 8% for both methods. Conclusion. The applied techniques are suitable for determining of Indocyanine Green in human blood plasma. LC-MS method provides greater sensitivity and selectivity, making it more appropriate for pharmacokinetic studies, while LC-DAD is suitable for routine clinical applications.