Obţinerea matricilor tridimensionale extracelulare ale ficatului

Abstract

Introducere. Creşterea numărului persoanelor ce necesită transplant de ficat şi insuficienţa donatorilor de organe, cât şi avansarea în bioinginerie a permis dezvoltarea de noi strategii terapeutice ce presupun generarea organelor artificiale funcţionale, obţinute prin tehnologia de decelularizare şi crearea matricei extracelulare şi recelularizarea ulterioară acestora. Scop. actualei lucrări este obţinerea unei matrice prin decelularizarea ficatului cu păstrarea arborelui vascular al acestuia. Materiale şi metode. În calitate de obiect de studiu au servit ficați de şobolan (n=9) care au fost supuse decelularizării cu soluţie sodiu dodecilsulfat de 0,1 şi 0,5 % şi cu combinaţia de sodiu dodecilsulfat de 0,1 şă 0,5 % şi anticuagulant. Ulterior, s-a efectuat extracţia acizilor nucleici conform protocolului de extracţie QIAamp Blood Mini Kit (2003). Rezultate. În urma decelularizării ţesutului hepatic am obţinut matrice hepatice decelularizate. Cuantificarea acizilor nucleici a relevat existenţa unei mici cantităţi de ADN 1,04±0,43 ng/μl, * p<0,05 în matricile decelularizate cu anticuagulant şi soluţie sodiu dodecilsulfat. Prin metoda de decelularizare numai cu agent de decelularizare SDS am obţinut o cantitate mai mare de acizi nucleici fapt ce a relevat o decelularizare mai puţin eficientă 5.2 ± 2.19 ng/μl, * p<0,05. Concluzii. Cuantificarea conţinutului de acizi nucleici a matricilor decelularizate prin metoda cu anticoagulant şi detergent SDS a determinat valori mai mici de acizi nucleici, ceea ce denotă o decelularizare mai eficientă a segmentelor de ţesut hepatic decelularizat şi obţinerea unei bioconstrucţii pentru recelularizare.

Introduction. The growing of people number who need the liver transplant and the insufficiency of organ donors, as the advancement in bioengineering has enabled the development of new therapeutic strategies which involve generation of functional artificial organ, obtained by the decellularization technology and create extracellular matrix and their subsequent recellularisation. Purpose. Is to obtain a liver matrix by decellularization and to maintain its vascular tree. Materials and methods. As the object of this study they served rat livers (n = 9) which were subjected to decellularization with sodium dodecyl sulfate solution 0.1 and 0.5% and the combination of sodium dodecyl sulfate 0.1 to 0.5% and anticoagulant. Subsequently, the extraction of nucleic acids was performed according to the protocol QIAamp Blood Mini Kit (2003). Results. After the liver tissue decellularization we obtained the matrix of decellularised liver. The quantification of nucleic acids revealed the existence of a small amount of DNA 1.04 ± 0.43 ng/μl, * p<0,05 in decellularised matrix with sodium dodecyl sulfate solution and anticoagulant. After decellularization by the method with SDS exclusively, we obtained a larger amount of nucleic acids which revealed a less efficient decellularization 5.2 ± 2.19 ng/μl, * p <0.05. Conclusions. The quantification of nucleic acids content of decellularised matrix by the method with anticoagulant and detergent SDS, they resulted lower values of nucleic acids, which suggested a more efficient decellularization of liver tissue segments and we achieved a decellularised bioconstruction for recellularisation.