Separarea şi dozarea acidului ascorbic prin HPLC: o analiză a literaturii ştiinţifice

Abstract

Obiectivul studiului: Analiza publicaţiilor relevante în privinţa metodelor de separare şi dozare a acidului ascorbic prin HPLC (excluzând metodele LC/MS), pentru stabilirea principalelor caracteristici ale acestora, care să ghideze selecţia unei metode în funcţie de obiectivele urmărite şi resursele disponibile. Materiale şi metode: S-a realizat o interogare computerizată Medline utilizând cuvinte-cheie adecvate (“HPLC AND ascorbic”), iar rezultatele returnate au fost revizuite pentru selectarea celor relevante. S-au analizat în special date referitoare la tipul de coloană, fază mobilă, debit şi tipul de eluţie (izocratică sau în gradient); metoda de detecţie; limita de detecţie; timpul de rulare a analizei; prepararea probelor (în funcţie de matricea analitică); datele referitoare la validitatea metodei şi stabilitatea acidului ascorbic în cursul analizei. Rezultate şi discuţii: Interogarea Medline a returnat 1881 de articole, publicate între anii 1975 şi 2014, dintre care 122 au fost selectate ca relevante pentru analiză. Au fost dezvoltate metode pentru o largă varietate de probe biologice. S-au utilizat mai multe coloane cromatografice (faze staţionare), dar majoritatea metodelor publicate au aplicat coloane cu fază inversă. În principal se utilizează detecţia electrochimică (peste 40% din publicatiile analizate) sau UV (de cele mai multe ori în jurul valorii de 254 nm; peste 40% din articole), mai puţin cea fluorimetrică în urma derivatizării pre- sau postcoloană (sub 10% din articole). S-a propus o varietate considerabilă de faze mobile, de cele mai multe ori cu un pH acid (3-4) şi o componentă majoritară apoasă (≥ 70%). Limitele de detecţie publicate au fost de ordinul microgramelor şi picogramelor, iar durata separărilor a variat între 3-5 şi 60 minute. Acurateţea diverselor metode publicate a fost în toate cazurile de peste 90%. Numeroase publicaţii evidenţiază problemele de stabilitate a acidului ascorbic şi propun diverse soluţii pentru protecţia acestuia în cursul analizelor. Concluzii: Marea varietate de metode permite dozarea adecvată a acidului ascorbic dintr-o varietate de matrice, dar există încă limitări în comparabilitatea inter-laboratoare.