Introducere. Linezolidul (LNZ) este unul dintre principalele
medicamente utilizate în tratamentul tuberculozei multidrog-
rezistente (TB-MDR). La moment determinantele genetice
asociate cu rezistenţa la LNZ nu sunt pe deplin caracterizate.
Scopul studiului a fost de a descrie mutaţiile asociate cu
rezistenţa la LNZ prin aplicarea secvenţierii întregului genom
(WGS) și evaluarea factorilor de risc asociaţi cu rezistenţa la
LNZ pe un set de tulpini de Mycobacterium tuberculosis (MTB)
izolate de la bolnavii de TB-MDR din Republica Moldova.
Material și metode. A fost realizat un studiu retrospectiv
transversal pe un set de tulpini de MTB preluate din biobanca
Laboratorului Naţional de Referinţă în Microbiologia Tuberculozei
(LNRM). Au fost identificate toate tulpinile MTB stocate
în perioada 2017-2018, obţinute din sputa pacienţilor cu
TB-MDR, care au administrat LNZ în schema de tratament pe
parcursul ultimilor doi ani, indiferent de durata administrării
LNZ. Au fost considerate eligibile pentru studiu doar tulpinile
MTB izolate de la pacienţii cu o expunere cumulativă la LNZ
mai mare de 30 de zile. Datele WGS ale tulpinilor de MTB incluse
în studiu au fost comparate cu rezultatele testelor fenotipice
de sensibilitate pe medii lichide pentru 3 concentraţii
de LNZ (0,5 mg/L; 1,0 mg/L; 2,0 mg/L). Caracteristicile clinice
ale pacienţilor din studiu au fost preluate din Registrul naţional
electronic al bolnavilor cu TB (SIME-TB). Regresia logistică
multiplă a fost efectuată pentru a determina factorii de risc
pentru rezistenţa la LNZ.
Rezultate. 52/74 (70,3%) tulpini MTB au fost incluse în
studiu, dintre acestea 15 (28,8%) au fost fenotipic rezistente
la LNZ, dintre care în cazul a 12/52 (23,1%) tulpini a fost
găsită o corelarea genotipică cu rezistenţa la LNZ. În 8 cazuri
au fost găsite mutaţii în gena rplC (460T>C). În alte 4 cazuri,
au fost identificate mutaţii în gena rrl (2746G>A; 2814G>T;
2810A>C; 2270G>T). S-a determinat o asociere semnificativă
între rezistenţa la LNZ și numărul de medicamente active din
regimul de tratament TB-MDR (OR 0,23; 95%CI -0,03 - 0,70;
p = 0,04). O asociere mai slabă s-a stabilit cu numărul de doze
de LNZ administrate anterior (OR 1,01; 95%CI 1,004-1,03; p
= 0,03).
Concluzii. La majoritatea tulpinilor de MTB studiate, rezistenţa
la LNZ a fost asociată cu mutaţii în genele rrl și rplC.
Numărul insuficient de medicamente active în regimul de tratament
al TB-MDR crește șansele de apariţie a rezistenţei la
LNZ.
Introduction. Linezolid (LNZ) is one of the main drugs
used for multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB) treatment.
Genetic targets associated with resistance to LNZ are
not fully characterized. The aim of the study was to describe
mutations associated with LNZ resistance by applying whole
genome sequencing (WGS) and to assess the risk factors for
LNZ resistance in a set of M. tuberculosis clinical isolates from
the Republic of Moldova.
Material and methods. We conducted a retrospective
cross-sectional study on a set of MTB isolates retrieved from
the biobank of National Reference Laboratory for Tuberculosis
Microbiology (NRLM). We identified all sputum culture isolates
stored during 2017-2018, obtained from adult MDR-TB
patients who had LNZ as part of their MDR-TB treatment at
any time during two years before the collection corresponding
sputum sample. Only isolates from patients with a cumulative
exposure to LNZ longer than 30 days were considered eligible
for the study. We performed WGS of the MTB strains and
compared these results with liquid culture-based susceptibility
tests on 3 concentrations of LNZ (0.5 mg/L; 1.0 mg/L; 2.0
mg/L). The clinical characteristics of the study patients were
retrieved form the National TB Data Base (SIME-TB). The multiple
regression analysis was performed to assess risk factors
for LNZ resistance.
Results. 52/74 (70,3%) isolates were included into the
study of them 15 (28,8%) were phenotypically LNZ resistant.
However only in 12/52 (23,1%) isolates genotypic correlates
of LNZ resistant was found. In 8 cases mutations were detected
in the rplC gene (460T>C). In other 4 cases the identified
mutation implied rrl gene (2746G>A; 2814G>T; 2810A>C;
2270G>T). In a multivariate logistic regression model, significant
association between LNZ resistance and the number of
the active drugs in the MDR-TB treatment regimen (OR 0,23;
95%CI 0,03 – 0,70; p = 0,04) was found. A weaker association
was found with the number of the previously taken LNZ doses
(OR 1,01; 95%CI 1,004 – 1,03; p=0,03).
Conclusions. In most of the studied MTB isolates LNZ
resistance was associated with mutations in the rrl and rplC
genes. A reduce number of the active drugs in the LNZ containing
treatment regimen increase the chance of LNZ resistance
emergence.
