Introducere. Prelevarea și transportarea sângelui capilar
în formă de spoturi uscate (DBS) este mai comod comparativ cu sângele venos. Totodată, nivelurile multor metaboliți,
analizați în DBS, diferă de cele plasmatice și necesită recalcularea lor după valorile hematocritului (Hct). Ultimul nu
poate fi măsurat direct în DBS, dar poate fi apreciat după
nivelul de hemoglobină (Hb). Una din cele mai simple
metode de măsurare a Hb, bazată pe transformarea ei în clorhidrat de hematină, este aplicabilă pentru sânge lichid, dar
în cazul DBS se reduce extracția hematinei. Scopul lucrării.
Crearea unei metode optimizate, care va asigura extracția
completă a hematinei din DBS, totodată va permite determinarea și altor metaboliți în același disc, decupat din DBS.
Material și metode. Spectrofotometru Lambda 25 (Perkin
Elmer), reactivi și solvenți (Sigma-Aldrich). Probele model
cu diferite valori de Hct au fost preparate din sânge de la
donatori. Discurile din DBS, intacte sau după extracția aminoacizilor cu metanol-apă (2:1) sau acid percloric 3%, s-au
tratat cu acid formic (metoda propusă) sau acid clorhidric
0.02 M (metoda de referință) cu agitare timp de 60 min.
Hematina s-a măsurat în extracte după absorbanța optică
la 520 nm. Rezultate. La utilizarea acidului formic plenitudinea extracției hematinei a atins valorile 92.9±1.0% din
DBS intacte, 97.9±0.3% după extracția cu metanol apos și
96.5±0.5% după extracția cu acid percloric. La aplicarea
metodei de referință aceste valori au constituit respectiv
76.1±0.8%, 74.4±1.4% și 49.2±2.1%. Răspunsul analitic
pentru metoda propusă este linear în diapazonul Hct de
la 0.19 până la 0.65. Concluzii. S-a elaborat o metodă simplă, ce permite aprecierea sigură a nivelului de Hct în DBS,
inclusiv după extragerea altor metaboliți analitici.
Background. Collecting and transporting capillary blood
in the form of dried spots (DBS), is more convenient compared to venous blood. At the same time, the levels of many
metabolites, analyzed in DBS, differ from the plasma levels,
and require their recalculation according to the hematocrit
(Hct) values. The latter cannot be measured directly in DBS
but can be estimated from the hemoglobin (Hb) level. One of
the simplest methods of measuring Hb, based on its conversion to hematin hydrochloride, is applicable for liquid blood
but leads to reduced extraction of hematin in case of DBS.
Objective of the study. Creation of an optimized method,
which will ensure the complete extraction of hematin from
DBS and will allow the determination of other metabolites
in the same disc, cut from DBS. Material and methods.
Lambda 25 spectrophotometer (Perkin Elmer), reagents,
and solvents (Sigma-Aldrich). Model samples with different
Hct values were prepared from donated blood. DBS discs, intact or after extraction of amino acids with methanol-water
(2:1) or 3% perchloric acid, were treated with formic acid
(proposed method) or 0.02 M hydrochloric acid (reference
method) with stirring for 60 min. Hematin was measured
in extracts by optical absorbance at 520 nm. Results. When
using formic acid, the completeness of hematin extraction
reached values of 92.9±1.0% from intact DBS, 97.9±0.3%
after extraction with aqueous methanol and 96.5±0.5% after extraction with perchloric acid. When applying the reference method, these values were respectively 76.1±0.8%,
74.4±1.4% and 49.2±2.1%. The analytical response for the
proposed method is linear in the Hct range from 0.19 to
0.65. Conclusions. A simple method was developed, which
allows the certain estimation of the Hct level in DBS, including after the extraction of other analytical metabolites.
