Introducere. Timochinona este un compus bioactiv de tip chinonă, cu nucleu benzochinonic para-substituit obţinut din aşa plante ca Nigella sativa şi Monarda fistulosa. Din cauza instabilităţii la factori externi şi interacţiunea cu proteinele plasmatice, s-a efectuat derivatizarea pentru îmbunătăţirea detectabilităţii. Scop. Optimizarea condiţiilor cromatografice pentru cuantificarea derivatului TQ în soluţii pure şi plasmă sanguină, cu aplicabilitate în ulterioarele studiile farmacocinetice. Material şi metode. Pentru efectuarea analizei a fost utilizat HPLC Agilent 1260, Spec-trofotometrul Lambda 25 cu detecţie UV-VIS, balanţă analitică digitală RADWAG şi centrifugă de laborator Sigma, faza mobilă a constituit ACN în TFA, ca standard intern convenabil s-a dovedit a fi Carbamazepina, iar ca reactiv pentru obţinerea derivatului s-a folosit 2-mercaptoetanol. Rezultate. Cuantificarea derivatului TQ în soluţii pure s-a efectuat pe coloana Zorbax Eclipse Plus C18, fază mobilă compusă din 40-45% ACN în soluţie apoasă 0,05% TFA cu un debit de 1,2 ml/min, cu detecţie la 306 nm, corespunzător maximului de absorbţie al derivatului TQ-ME. Carbamazepina a fost eluată înaintea derivatului cu o bună separarea a vârfurilor şi răspuns practic egal al detectorului la concentraţie identică cu cea a analitului. Pentru analiza pe plasmă sanguină, s-a determinat că utilizarea fazei mobile cu 42% acetonitril asigură o separare selectivă corespunzătoare şi un timp de analiză redus, de aproximativ 3 minute. Concluzii. Optimizarea parametrilor a permis dezvoltarea unei metode eficiente şi reproductibile pentru dozarea derivatului TQ în soluţii pure şi plasmă sanguină, cu separare selectivă, timp de analiză redus şi precizie sporită datorită utilizării carbamazepinei ca standard intern.
Introduction. Thymoquinone (TQ) is a natural bioactive compound from the quinone class, found mainly in Nigella sativa and Monarda fistulosa. Its therapeutic potential is limited by poor stability and strong plasma protein binding. To overcome these barriers, derivatization was applied to improve analytical detection. Objective. Optimization of chromatographic conditions for quantification of the TQ derivative in pure solutions and blood plasma, with applicability in subsequent pharmacokinetic studies. Material and methods. Chromatographic analysis was performed using an Agilent 1260 HPLC system with UV-DAD detection and a Spectrophotometer Lambda 25 UV-VIS. The mobile phase consisted of acetonitrile (ACN) mixed with trifluoroacetic acid (TFA). Carbamazepine was used as internal standard and 2-mercaptoethanol was selected for in-sample derivatization of TQ. Results. A reliable chromatographic method was developed for TQ derivative quantification. In pure solutions, separation was performed on a Zorbax Eclipse Plus C18 column with 40-45% ACN in 0.05% TFA at 1.2 ml/ min. Detection was carried out at 306 nm, corresponding to the absorbance peak of the TQ-ME derivative. Carbamaz-epine eluted before the analyte, showing excellent peak separation and nearly identical detector response at equal concentrations. For blood plasma samples, 42% ACN in the mobile phase ensured good chromatographic selectivity and reduced analysis time to approximately 3 minutes, enabling rapid, precise quantification. Conclusion. The optimized parameters allowed the development of an efficient and reproducible method for TQ derivative quantification in pure solutions and blood plasma, ensuring selective separation, short analysis time, and increased precision through the use of carbamazepine as the internal standard.
