Optimizarea protocolului de inițiere pentru culturi din specii ale familiei Lamiaceae

Abstract

INTRODUCERE. Familia Lamiaceae include numeroase specii cu valoare terapeutică (antimicrobiană, digestivă, calmantă și antiinflamatoare), datorită conținutului bogat în uleiuri esențiale, flavonoide, taninuri și alți compuși activi. Menționăm speciile cele mai reprezentative specii ca sovârvul Origanum vulgare, izmă-bună Mentha citrata și salvie Salvia officinalis. SCOPUL STUDIULUI. Elaborarea unui protocol eficient de sterilizare pentru unele specii de plante medicinale din lamiacee pentru asigurarea eliminării complete a contaminanților microbieni (bacterii, fungi) în culturile in vitro. MATERIAL ȘI METODE. Drept sursă de material au servit organe vegetative recoltate din plante sănătoase (ex. fragmente de tulpină, noduri cu muguri axilari, fragmente de tulpină apicală) selectate din porțiuni tinere și viguroase ale plantei. Materialul vegetal adus în condiții de laborator, destinat inoculării in vitro, a fost expus 30 minute sub apă curgătoare, ulterior transferat într-o soluție de apă distilată + câteva picături hipoclorit, după câteva clătiri a fost sterilizat în soluție de NaOCl de 5%, timp de 10 și 20 minute, ulterior clătit de 4–5 ori cu apă distilată sterilă. Explantele fasonate și dimensionate (2-5 mm) au fost inoculate aseptic pe mediul Murashige & Skoog (MS) steril, solidificat cu agar, fără antibiotice, pentru evaluarea eficienței sterilizării în laminarul cu flux de aer steril. REZULTATE. Inoculii au fost plasați pe mediu Murashige-Skoog (1962) lipsit de fitohormoni, dar suplimentat cu 100 mg/L mio-inozitol, 0,5 mg/L tiamină, 1,0 mg/L piridoxină, 1,0mg/L acid nicotinic, 2,0 mg/L glicină, 25 g/L zaharoză și 8 g/L agar, 2g/L cărbune activ. Mediile de cultură au fost ajustate la pH-ul 5,8 înainte de autoclavare la temperatura 121°C timp de 25 min. Creșterea și dezvoltarea a fost efectuată în camera de cultivare la 25±20C cu fotoperioadă de 16/8 ore (ciclu lumină/întuneric) furnizată de becuri fluorescente albe reci (1500-3000Lx). Utilizarea hipocloritului de sodiu 5% timp de 10 minute s-a dovedit a fi eficientă în decontaminare și păstrarea viabilității. Hipocloritul de sodiu de 5% timp de 20 minute, deși eficient în sterilizare și în reducerea contaminărilor, totuși a provocat fitotoxicitate, exprimată prin brunificarea explantelor și inhibarea regenerării la o cotă semnificativă de probe. CONCLUZII. Studiul a evidențiat necesitatea și importanța unui protocol de sterilizare bine echilibrat pentru materialul vegetal provenit de la speii de plante din lamiacee, în vederea utilizării acestuia în culturi in vitro. Hipocloritul de sodiu 5% aplicat timp de 10 minute s-a dovedit a fi cel mai eficient tratament, asigurând o bună decontaminare fără a compromite viabilitatea explantelor.