Determinarea selectivităţii metodei HPLC de dozare a ciprofloxacinei în picături auriculare

Abstract

Introducere. Selectivitatea se determină în procesul de validare a metodelor utilizate pentru identificarea substanţelor medicamentoase, determinarea impurităţilor, determinarea cantitativă a conţinutului de substanţă în forma medicamentoasă. în determinarea cantitativă selectivitatea metodei poate fi demonstrată prin adăugarea la substanţa medicamentoasă a cantităţilor corespunzătoare de impurităţi sau substanţe auxiliare pentru demonstrarea faptului că, prezenţa acestor substanţe nu influenţează rezultatele analizei. Scopul studiului. Este de a determina slectivitatea metodei HPLC de dozare a ciprofloxacinei în picături auriculare. Material şi metode. Cromatograful de lichide Shimadzu cu detector spectrofotometric UV-VIS, coloana Nucleosil C18, 150x4 mm, marimea particulelor 5 pm, temperatura coloanei 40°C, debitul fazei mobile l,5mL/min, injecţie 5pL; faza mobilă: soluţie 0,2% acid fosforic 85% ajustată la pH 3,3 cu trietilamină:acetonitril (90:10). S-a utilizat substanţa activă ciprofloxacină (C), picături auriculare cu ciprofloxacină, etilendiamino derivatul ciprofloxacinei (ImC), soluţie placebo. Rezultate. A fost testată stabilitatea soluţiei analizate în condiţii de stres oxidativ, alcalin, acid, termic, iradiere UV (soluţii de stres). Au fost respectate condiţiile de admisibilitate: rezoluţia cel puţin 1.5, lipsa unui pic cromatografie suplimentar care să interfere cu picurile corespunzătoare ImC sau C. în cromatogramele obţinute în urma injecţiilor soluţiilor stres nu au existat picuri corespunzătoare produşilor de degradare care să interfere cu picul C . Au fost obţinute cromatograme la k=278 nm. S-a determinat, că stresul UV determină o degradare majoră cu formare de ImC; stresul termic, puternic bazic şi acid afectează foarte puţin stabilitatea; stresul bazic oxidant are un impact distructiv major, fiind semnalate şi alte produse de degradare de rând cu ImC. Concluzii. Metoda propusă este selectivă deoarece are capacitatea de a separa picul corespunzător al C de picul ImC, precum şi de picurile celorlalţi produşi de degradare obţinuţi în urma stresului fizic şi chimic. Excipienţii din forma farmaceutică nu interferăcu picurile ImC sau a C.

Introduction. Selectivity is determined in the process of validation of the methods of identification, determination of impurities and assay of active substance from the dosage form. The selectivity of assay method can be determined by adding appropriate quantities of impurities or auxiliary substances to the active substance, thus demonstrating that the presence of these substances has no influence to the results of the analysis. The aim of the study. To determine the selectivity of the HPLC assay method of ciprofloxacin from ear drops. Material and methods. Shimadzu liquid chromatograph with a UV-VIS Spectrophotometric detector, nucleosil C-18 column, 150x4 mm, particle size 5 pm, column temperature 40 °C, the flow rate of mobile phase 1.5 mL/min, injection 5 pL, mobile phase: 0.2% solution of phosphoric acid 85% adjusted to pH 3.3 with triethylamine: acetonitrile (90: 10). It was used ciprofloxacin - active substance (C), ear drops containing ciprofloxacin, ciprofloxacin ethylenediamine derivative (ImC) and placebo solution. Results. It was tested the stability of the sample in oxidative stress, alkaline, acid, thermic conditions and UV irradiation (stress solutions). It was complied with the admissibility conditions: resolution of at least 1.5, the absence of an additional peak which interferes with the chromatographic peaks corresponding to the ImC or C. In the chromatograms obtained from the injected stress solutions, there were no peaks corresponding to degradation products which interfere with the peak C.The chromatograms were obtained at X = 276 nm. It was determined that UV stress causes a significant degradation with formation of ImC; the thermic, strong alkaline and acid stresses affect slightly the stability; basic oxidizing stress has a major destructive impact being reported degradation products, including ImC. Conclusions. The proposed method is selective because it has the ability to separate the corresponding peak C from peaks of ImC and other degradation products obtained by physical and chemical stress.The excipients of pharmaceutical dosage form have no interference with the peaks of ImC or C.