The functional activity of CHO cell lines expressing different ATP7B mutations (The cytotoxicity of the certain concentrations of Copper and Zinc)

Abstract

Boala Wilson este un bun exemplu modern pentru dezvoltarea ascensivă a ştinţei medicale. Cercetările moderne în domeniul biologiei moleculare şi celulare încearca să descopere multe mistere a bolii Wilson. În timpul actual există un interes crescut în cercetarile legate cu fi ziologia metalelor. În timpul de faţă, noi observăm discuţii fierbinţi în cercurile ştiinţifi ce cu privire la utilizarea preparatelor ce conţin Zn la tratarea bolii Wilson. Lucrarea dată decernează studiile activităţii funcţionale a liniilor de celule CHO, ce se expresează în diferite mutaţii ATP7B prin influenţa anumitor soluţii cu concentraţie determinată de Cu şi Zn şi determinarea citotoxicitaţii legăturilor date. Material şi metode. Au fost utilizate culturile celulare din colecţia germană de culturi celulare (DSMZ). Folosind metoda transducţiei retrovirale, sau obţinut 12 tulpini celulare CHO, ce se expreseaza în diferite mutaţii ATP7B. Mutaţiile se localizează în domeniul de legatură cu Cu (n=2), TM (n=4), TGE bucle (n=1) legături de bucle ATP (n=5) gene ATP7B. Pentru aprecierea citotoxicităţii se foloseşte testul MTT. Rezultate. În rezultatul cercetărilor noastre, noi am obţinut următoarele date: concentraţia soluţiei de Zn 500mikroM reprezintă o concentraţie toxică procent de moarte a celulelor se echivalează cu 0,22%. Concentraţia soluţiei de 50microM stimulează diviziunea celulară. Procentul de celule CHO ce au supravieţuit, şi ce expresează gena ATP7B, în soluţie de 1mM de Cu creşte pîna la 20% la adăugarea în soluţia dată 50microM de soluţie cu Zn. Celulele CHO, ce nu expresează gena ATP7B îşi măresc cu 57% capacitatea de supravieţuire în concentraţia de 0,5mM CuCl2 şi 50 Mm ZnCl2 în mediul de cultură. Concluzii. Ionii de Zn preîntîmpină toxicitatea ionilor de Cu fără dependenţă de faptul dacă se expresează sau nu gena ATP7B şi independent faţă de ce fel de mutaţie-gravă sau medie după forma clinică.

Введение. Болезнь Вильсона является отличным примером современного поступательного развития медицинской науки. Современные исследования в области клеточной и молекулярной биологии пытаются раскрыть многие загадки болезни Вильсона. В настоящее время существует повышенный интерес к исследованиям, связанных с физиологией металлов. В настоящее время, мы наблюдаем горячие дебаты в научных кругах вокруг применения препаратов цинка при лечении болезни Вильсона. Данная работа посвящена исследованию функциональной активности СНО клеточных линий, экстрессирующих различные мутации ATP7B при воздействии определенных концентраций растворов Cu и Zn и определение цитотоксичности данных соединений. Материал и методы. Культуры клетки были использованы из Немецкой Коллекции Культур Тканей (DSMZ). Используя метод ретровирусной трансдукции, были получены 12 СНО клеточных линий, экспрессирующие различные мутации ATP7B. Мутации находятся в медь-связывающем домене (n = 2), TM (n = 4), TGE петли (n = 1), АТФ-связывающей петли (п = 5) гена ATP7B. Для оценки цитотоксичности использовался МТТ-тест.