Background. Based on limited availability of autologous vascular grafts, the development of tissueengineered blood vessels (TEBVs) has reached significant research interest in the last couples of years.
Fabrication of TEBVs from decellulazed scaffolds seems to be an attractive research strategy. Objective
of the study. To develop a method for the generation of cell-free vascular scaffolds by combining a
detergent-based decellularization (DC) strategy with subsequent nuclease treatment. Material and
Methods. Cryopreserved porcine aortae were treated with detergents for 48h under rotation (24h
exposure to 0.5% SDS and 0.5% SDC, followed by 24h exposure to 1% TritonX-100) with/without
following enzymatic digestion (48h exposure to 300 U/ml DNase I solution). The efficacy of DC was
evaluated by 4’,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI) and hematoxylin and eosin (H&E) stainings.
Results. H&E staining revealed no persisting cells in all groups, including the samples which were not
treated with DNase. The DAPI stain of those specimens, however, uncovered substantial amounts of
residual DNA. Additional enzymatic treatment with DNase led to such a reduction of residual DNA that
DAPI positive structures could not be detected. Conclusion. A direct stain of DNA, e.g. DAPI, is much
more sensitive measure for the presence of cell debris than the H&E stain. In addition, detergent-based
decellularization technique per se is not sufficient for complete cell and debris removal and has to be
combined with a DNase digestion.
Introducere. Din cauza deficiențelor funcționale a grefelor vasculare (GV) existente, dezvoltarea
substituenților sanguini, prin tehnicile de inginerie tisulară, a avansat semnificativ în ultimii ani.
Producerea GV în baza matrixului acelular pare a fi o strategie atractivă. Scopul studiului: Dezvoltarea
unei metode de generare a scaffoldului decelularizat, prin combinarea unei tehnici bazate pe detergenți,
suplimentată cu prelucrarea cu nuclează. Material și Metode. Aorta porcină crioprezervată a fost tratată
cu detergenți timp de 48h (expunerea la 0.5% SDS și 0.5% SDC pe 24h, urmată de spălarea cu soluție
de 1% TX-100) cu/fără următoarea digestie enzimatică (prelucrarea cu soluție 300 U/ml DNază).
Eficacitatea decelularizării (DC) a fost evaluată prin colorația 4’,6-Diamidino-2-fenilindol(DAPI) și
Hematoxilină-Eozină (H&E). Rezultate. Colorația H&E nu a evidențiat celule persistente în nici un
grup, inclusiv în probele tratate fără nuclează. Cu toate acestea, colorația DAPI a acelorași specimene a
descoperit cantități substanțiale de ADN rezidual. Prelucrarea suplimentară cu DNază a dus la o reducere
semnificativă a ADN-ului subzistent, încât structuri DAPI pozitive nu au fost detectate. Concluzii.
Colorațiile cu afinitatea pentru ADN, d.e. DAPI, sunt mai sensibile pentru evaluarea prezenței resturilor
celulare, decât H&E. Tehnica DC bazată pe detergenți nu este suficientă pentru îndepărtarea completă
a celulelor și a detritului, și trebuie combinată cu prelucrarea enzimatică.
